OD600 DiluPhotometer™分光光度計(jì)是一款小巧,易于操控的儀器,專門用于測(cè)量接近600 nm波長(zhǎng)處的樣品。它適用于包括大腸桿菌和酵母等多種細(xì)胞的生長(zhǎng)速度的測(cè)量。OD600 DiluPhotometer™分光光度計(jì)搭配使用Implen’s DiluCell™ 10或DiluCell™ 20自動(dòng)稀釋比色皿方便測(cè)量樣品量少的樣品(各自僅需200 µl 和100 µl的樣品量)。 DiluCell™ 10和DiluCell™ 20兩個(gè)型號(hào)的比色皿可分別對(duì)樣品進(jìn)行10倍和20倍稀釋。在帶寬為40 nm的OD600上也可用Bradford法(595 nm)定量分析蛋白質(zhì)。OD600 DiluPhotometer™分光光度計(jì)的小巧性和便攜性使其便于在培養(yǎng)箱和厭氧條件下使用。
OD600 DiluPhotometer™經(jīng)設(shè)計(jì)用于在波長(zhǎng)600 nm附近進(jìn)行分光光度分析,測(cè)定細(xì)菌和酵母生長(zhǎng)率和蛋白質(zhì)定量(例如Bradford法)。該儀器采用電池供電操作,可以方便地搬到培養(yǎng)室中,也可在厭氧條件下使用。充滿電后電池可使用1個(gè)月。通過(guò)600nm LED光源與光纖結(jié)合,可進(jìn)行光密度測(cè)量。如有液體灑出,可以很容易地從表面擦掉,可以用甲醛、環(huán)氧乙烷對(duì)樣品槽區(qū)清洗消毒.
朗伯比爾定律
朗伯-比爾定律,也稱為比爾定律,將光吸收與樣品的屬性關(guān)聯(lián)在一起。這一定律表明,光通過(guò)特定樣品時(shí)(T =I/ IO,I=透射光,IO =入射光),特定化合物的摩爾消光系數(shù)(ε)、材料中吸附物種的濃度(c)和光傳播距離(d)之間存在對(duì)數(shù)關(guān)系 。當(dāng)保持所有條件不變而只改變光程(光傳播距離)時(shí),可以通過(guò)比爾定律自動(dòng)變化樣品稀釋度。OD600 DiluPhotometer™和DiluCell™結(jié)合使用,使得這一原則得以實(shí)現(xiàn)。
自動(dòng)樣品稀釋
以前必須使用體積至少為1ml的標(biāo)準(zhǔn)比色皿,而且需要額外手動(dòng)操作稀釋樣品。采用Implen的DiluCell™時(shí),所需樣品量較低,且可以自動(dòng)稀釋樣品。DiluCell™比色皿的*設(shè)計(jì)使光程從標(biāo)準(zhǔn)的10 mm降到0.5 mm(DC 20)或1.0 mm(DC 10)。根據(jù)朗伯-比爾定律,光程縮短可以將樣品自動(dòng)稀釋20倍(DC 20)或10倍(DC 10)。DiluCell™自動(dòng)稀釋可以節(jié)省時(shí)間,并排除了稀釋誤差和交叉污染。
Bradford法蛋白質(zhì)定量
Bradford法是一種快速而的總蛋白質(zhì)濃度測(cè)定方法,通過(guò)將未知蛋白與考馬斯亮藍(lán)G-250染料結(jié)合來(lái)定量測(cè)定樣品的蛋白質(zhì)濃度。這種方法的定量依據(jù)是,在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合后,考馬斯亮藍(lán)G250的大吸收從465nm遷移到595nm。將上述結(jié)合與其他不同的、已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白與染料結(jié)合進(jìn)行比較,從而計(jì)算未知蛋白的濃度。以牛血清白蛋白(BSA)標(biāo)準(zhǔn)曲線為例。
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